傳統的菌種鑒定主要依據形態特征和生理性狀，需要進行分離培養及一系列生化反應或免疫學檢測。方法復雜費時，對有些菌種也往往不能給出理想的鑒定結果。 應用分子生物學方法從遺傳進化角度闡明微生物種群之間的分類學關系是目前微生物分類學研究普遍采用的鑒定方法。安升達的菌種鑒定服務，采用Sanger測序的方法，比傳統的生化鑒定更加的快速，準確。

生物細胞DNA分子的一級結構中既具有保守的片段,又具有變化的堿基序列。保守的片段反映了生物物種間的親緣關系，而高變片段則能表明物種間的差異。利用保守區設計引物擴增高變區進而進行比對分析，就能區分不同的物種信息。

通過擴增測序的方法進行菌種鑒定，大多只能鑒定到屬，如需鑒定至種，還要如DNA雜交，生理生化指標等的綜合判斷。

細菌16S rDNA部分序列分析：擴增細菌16S rRNA前500 bp的片段，只需進行一個測序反應，即可得到含有部分種屬特異性的16S信息，是一種較為經濟便捷的鑒定方法。

細菌16S rDNA全序列分析：擴增細菌16S rRNA的全長序列，約1,500 bp左右，TA陽性克隆需進行三個測序反應，以得到較為全面的種屬特異性信息。

真菌ITS區：ITS位于18S和5.8S rDNA（ITS1）之間以及5.8S和28S rDNA之間（ITS2），是中度保守區域，種內相對一致，種間差異明顯，適合于等級水平較低的系統學研究。需要對兩個區域進行擴增和測序分析。

真菌18S：廣泛用于分析真菌菌株之間的差異，約1,500 bp左右，TA陽性克隆進行三個測序反應，得到較為全面的種屬特異性信息。

真菌26S rDNA D1/D2區：真菌大亞基上的26S rDNA分子，可分為D1、D2…D12等多個區域，其中D1/D2區域長度500 bp左右，可用于對真菌進行鑒定。該方法尤為適合對酵母菌進行鑒定。

安升達不接受有致病性的樣品。如果您的菌體帶有致病性，請您提供給我們菌體的基因組DNA或者將菌體進行加熱處理以殺死該致病菌，并放入我們指定的緩沖液進行郵寄。

安升達的菌種鑒定服務采用PCR擴增、測序的方法，即以客戶提供的菌株為模板直接進行PCR擴增，中間不經過傳代培養，因此不會引入新的污染，如果出現結果不一致的情況，一般有以下原因導致：

1）您提供的樣品含有其他雜菌； 2）您提供樣品的真實情況確認如此。建議您提供三次純化的菌株重新進行鑒定。

 客戶樣品PCR擴增失敗的可能原因有：

1）客戶提供的菌種從嚴格意義上講不是細菌或者真菌，或者客戶提供信息有誤；

2）客戶提供的是革蘭氏陽性菌，由于細胞壁較厚，采用常規方法不能有效地破壁；

3）培養基或菌體中含有抑制PCR的組分。

對于第二種和第三種，需要用基因組DNA。

測序結果出現套峰的可能原因：

1）測序結果個別堿基出現N，或者部分連續出現套峰，是由菌種rDNA多態性造成，對菌種鑒定無影響；

2）所有測序反應均出現大面積套峰，由于客戶提供樣品模板不純造成，這種情況需要客戶重新純化菌種或進行TA克隆。

微衛星，也叫做短串聯重復序列（STRs）或簡單重復序列（SSR），是指少數幾個核苷酸（一般為1~6個）為重復單位組成的簡單多次串聯重復序列，其長度大多在100bp以內。微衛星標記由核心序列和兩側保守的側翼序列構成。保守的側翼序列使微衛星特異地定位于染色體某一區域。核心序列重復數的差異則形成微衛星的高度多態性。微衛星上不同長度的等位基因按簡單的孟德爾方式遺傳，在基因組中含量豐富且分布均等，因此是一種十分理想的分子標記。

微衛星序列，也叫做短串聯重復序列（STRs），廣泛存在于各類真核基因組中，它具有多態性豐富、重復性好、呈孟德爾共顯性遺傳，檢測快速方便及結果穩定可靠等特點廣泛應用于遺傳圖譜構建、數量性狀位點（QTL）定位、標記輔助選擇、遺傳多樣性評估、遺傳檢測等研究領域。

通過普通PCR篩選得到適宜引物，然后進行熒光PCR擴增，擴增產物進行毛細管電泳分析并根據大小分離等位基因進行檢測。

PCR擴增后的等位微衛星可以用多種方法檢測，傳統采用聚丙烯酰胺凝膠電泳加放射顯影或銀染的方法，費時費力效率低。安升達采用ABI遺傳分析儀對熒光標記DNA片段進行檢測，加上分子量內標進行DNA片段長度計算，使STR分型變得高效快捷，結果也更加精確可靠。

安升達有多年的微衛星分析經驗，成功對植物，昆蟲，魚類、哺乳動物等物種進行STR檢測。我們合作的單位包括國內外多所高校（北京大學、四川大學、南京大學、西南大學、中國農業大學、軍事醫學科學院、北京林業大學、東北林業大學等）、科研單位以及制藥和生物技術企業等。

細胞株被錯誤識別及交叉污染等現象很普遍。據統計，15-20%實驗中所使用的細胞已經不是原來的細胞系，或者發生了交叉污染；國外15-25%的研究論文因為使用了被交叉污染和錯誤識別的細胞對研究產生了巨大的影響（如研究結果前后不一致或不可重復、錯誤的結論等），同時還浪費時間、精力和金錢。目前有些雜志要求在投稿時提供細胞STR分型圖譜，NIH等機構已經強烈建議將細胞系鑒定作為基因申請審批的一個必要條件，因此細胞鑒定尤為重要。

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安升達所使用的試劑盒有：Promega公司注冊商標生產的相關系列試劑盒； 基點認知技術(北京)有限公司生產的試劑盒；安升達公司自主研發的試劑盒

細胞STR鑒定主要應用于將人源細胞系用于研究和生產的用戶，包括但不限于以下領域：分子遺傳學，生物化學，細胞生物學，腫瘤生物學，神經生物學，藥物開發，疫苗研制，生物技術和制藥行業，再生醫學， HIV的檢測和治療等領域。

安升達已為國內外多所高校（南開大學、軍事醫學科學院等）、科研單位以及制藥和生物企業提供優質的細胞系鑒定和STR分析服務。

商業化試劑盒的檢測結果與ATCC、DSMZ等官網數據比對，根據官網的算法出具同源率數據；安升達公司研發的平臺，根據公司內部算法出具比對結果。

支原體污染可能導致細胞代謝、生長、形狀、附著異常，嚴重影響細胞功能研究和細胞毒性實驗的準確性等負面作用

支原體檢測樣本為細胞培養基上清，必須要保證培養細胞時間超過48小時，且細胞密度不小于80%

在客戶所提供樣品合格的基礎上，采用PCR法，設置陽性對照和陰性對照，避免實驗結果假陽性和假陰性

單核苷酸多態性（Single Nucleotide Polymorphisms，SNPs）是在基因組水平上由單個核苷酸變異引起的DNA序列多態性, 在群體中的頻率不小于1%。SNP在人類基因組中的發生頻率比較高，大約平均每1000個堿基中就有一個多態位點，其包括堿基的轉換、顛換、插入、缺失。具有數量大，分布廣及高度穩定性等特點，是第三代遺傳標記。

單核苷酸多態性（SNPs）是廣泛存在于基因組中的一類DNA序列變異，其頻率為1%或更高，其穩定可靠，并通常以二等位基因的形式出現。作為新一代分子標記，SNP在動植物遺傳圖譜構建、品種鑒定、物種起源與親緣關系、群體遺傳、分子育種、生物進化、疾病診治及藥物基因組學等諸多領域具有廣闊的前景。

安升達可采用Sanger測序法、Taqman探針法和質譜法進行SNP檢測。

Sanger測序法：通過對不同個體同一基因或基因片段進行測序和序列比較，以確定所研究的堿基是否變異。通常情況下，純合型SNP位點的測序峰為單一峰型，而雜合型SNP位點的測序峰為套峰，因而很容易將其區分開，通過該方法進行SNP檢測的檢出率接近100%，是使用最廣泛的一種檢測方法。

Taqman探針法：其核心是利用Taq酶的3’-5’核酸外切酶活性，切斷探針，產生熒光信號。針對不同的SNP位點需分別設計一對PCR引物和Taqman探針，適用于多樣品少量SNP位點的檢測。

質譜法：MassARRAY SNP分型技術結合了準確的引物延伸、基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜（MALDI-TOF MS）的優點，能夠快速、經濟、高重現性地進行SNP的分型驗證。通常單次可以對384個樣品進行25個SNPs位點檢測，非常高效經濟。

安升達有多年的SNP檢測經驗，成功對人、水稻、雪豹、赤擬谷盜、出血熱病毒、腮腺炎病毒、脊髓灰質炎病毒、細菌、真菌等物種進行SNP檢測。我們合作的單位包括國內外多所高校（北京大學、清華大學、天津醫科大學、蘭州大學、南開大學、中山大學、中國科學技術大學、四川大學、河南農業大學、鄭州大學等）、科研單位以及制藥和生物技術企業（北大第一醫院、醫科院腫瘤醫院、華西醫院、301醫院、阜外醫院、諾和諾德、和記黃埔、諾華、廣州金域醫學檢驗中心、中國科學院等）。

常規PCR技術：對PCR反應的終點產物進行定量和定性分析。無法對起始模板準確定量，無法對擴增反應實時監測。

熒光定量PCR：利用熒光信號的變化實時監測PCR擴增反應中每一個循環擴增產物量的變化，通過Ct值和標準曲線的分析對起始模板進行定量分析。熒光定量PCR具有敏感性高，需要樣品量少，特異性高，可以精確定量等的特點。

熒光定量PCR的應用范圍非常廣泛，可以應用于基因擴增、擴增特異性分析、基因定量分析、基因檢測、基因分型、SNP分析、單/多基因表達研究、高通量基因表達譜研究，疾病的早期診斷，遺傳病的早期診斷，藥物研究，及腫瘤的診斷，食品安全（病原微生物檢測，轉基因食品檢測動物疫病檢測）等。

安升達可以提供相對定量和絕對定量PCR，采用SYBR Green I法和Taqman探針法進行熒光定量PCR。

SYBR Green I法：

原理：SYBR Green I是一種結合于小溝中的雙鏈DNA結合染料，與雙鏈DNA結合后，其熒光大大增強。這一性質使其用于擴增產物的檢測非常理想。在PCR反應體系中，加入過量SYBR Green 熒光染料，SYBR Green 熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR Green染料分子不會發射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。

優點：對模板沒有選擇性，適用于任何DNA，使用方便（不必設計探針），非常靈敏，性價比高。

缺點：容易與非特異性雙鏈DNA結合，產生假陽性（可以通過溶解曲線的分析，優化反應條件），對引物的特異性要求高。

 

Taqman探針法：

原理：Taqman探針是最早用于定量的方法。其核心是利用Taq酶的3’-5’核酸外切酶活性，切斷探針，產生熒光信號，從而使熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。

優點：對目標序列的高特異性，設計相對簡單（與目標序列某一區域互補），重復性好。

缺點：每個檢測基因需單獨設計探針，價格相對較高，不易找到本底低的探針。

 

單克隆抗體測序可以提供包括重鏈及輕鏈可變區、恒定區序列，可變區、恒定區的核苷酸及氨基酸序列分析，V(D)J區結構分析；

此外，我們還可以結合客戶的需求，協商定制化信息分析內容。

對于利用抗體開發生物制藥等客戶，我們可提供經過FDA認證的GLP/cGMP規范化的序列檢測和質粒制備服務，充分滿足各種客戶的需求。

安升達在抗體測序領域建立的高效完善的技術流程依托于Sanger測序平臺以及高通量測序平臺，對于高通量測序平臺，可以根據需求選擇Illumina HiSeq 2500、Illumina MiSeq或Ion Torrent（PGM）平臺。

抗體測序主要應用于將抗體用于研究和生產的用戶，包括但不限于以下研究領域：免疫研究、傳染性疾病研究、腫瘤免疫研究、B細胞血液病研究、白血病研究、抗體藥等生物醫學領域。