基因KO/KI 相關服務的使用說明

使用時，請將樣品管于12000轉/分鐘離心1分鐘，使DNA聚集到管底，再開啟使用。質粒的保存溫度為-20°C，如果您不是一次性用完，可先分裝成多管，分步取用，以免反復凍融對質粒質量產生影響。

【穿刺菌】

穿刺菌4°C可貯存1個月。擴大培養時，您可挑取部分穿刺菌接種到3~5mL的液體培養基中，37°C培養。如需長期使用，您可取部分活化后的菌液制備成甘油菌，-80°C保存。

【甘油菌】

甘油菌-80℃可長期保存。

擴大培養時您可以選擇以下兩種方法：

挑取甘油菌一環，接種在LB固體培養基上(活化菌種)，37℃ 培養過夜(約16 小時);挑取一個菌落轉接在LB液體培養基中，37℃ 振蕩過夜(約12~16小時)。

直接吸取10~20 μL甘油菌，接種在LB液體培養基中， 37℃ 振蕩過夜(約12~16 小時)。

【常溫細胞】

收到T25培養瓶裝的細胞后請盡快進行以下實驗：

首先，觀察細胞培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請及時與安升達基因編輯部門聯系;

用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2~4小時，以便穩定細胞狀態;

靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(所拍照片將作為后續服務依據);建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態;

貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代;若未超過80%，移除細胞培養瓶內培養基，預留5mL左右繼續培養，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松;

懸浮細胞：將細胞培養瓶內液體全部轉移至50mL無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養基可收集備用，管底細胞沉淀加入5mL培養基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養，補加培養基至5mL;若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續培養，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。

如需長期使用，您可將傳代了的細胞凍存在-80°C保存。