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      基因KO/KI 相關服務的使用說明

       

      感謝您訂購安升達的基因KO/KI 相關服務!以下為產品的使用注意事項,請仔細閱讀以下說明并按要求操作,希望對您的實驗有所幫助。

      【凍干質粒/ssDNA】

      使用時,請將樣品管于12000轉/分鐘離心1分鐘,使DNA聚集到管底,小心開啟管蓋,以免引起粉末飛揚丟失。 再加入適量ddH2O或TE緩沖液,蓋好管蓋,渦旋震蕩使其充分溶解。

      【液態質?!?/strong>

      使用時,請將樣品管于12000轉/分鐘離心1分鐘,使DNA聚集到管底,再開啟使用。質粒的保存溫度為-20°C,如果您不是一次性用完,可先分裝成多管,分步取用,以免反復凍融對質粒質量產生影響。

      【穿刺菌】

      穿刺菌4°C可貯存1個月。擴大培養時,您可挑取部分穿刺菌接種到3~5mL的液體培養基中,37°C培養。如需長期使用,您可取部分活化后的菌液制備成甘油菌,-80°C保存。

      【甘油菌】

      甘油菌-80℃可長期保存。

      擴大培養時您可以選擇以下兩種方法:

      挑取甘油菌一環,接種在LB固體培養基上(活化菌種),37℃ 培養過夜(約16 小時);挑取一個菌落轉接在LB液體培養基中,37℃ 振蕩過夜(約12~16小時)。

      直接吸取10~20 μL甘油菌,接種在LB液體培養基中, 37℃ 振蕩過夜(約12~16 小時)。

      【常溫細胞】

      收到T25培養瓶裝的細胞后請盡快進行以下實驗:

      首先,觀察細胞培養瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有,請及時與安升達基因編輯部門聯系;

      用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養瓶蓋,將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2~4小時,以便穩定細胞狀態;

      靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(所拍照片將作為后續服務依據);建議細胞傳代培養后,定期拍照、記錄細胞生長狀態;

      貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養瓶內培養基,預留5mL左右繼續培養,直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松;

      懸浮細胞:將細胞培養瓶內液體全部轉移至50mL無菌離心管內,1200rpm離心5min,離心后上清培養基可收集備用,管底細胞沉淀加入5mL培養基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養,補加培養基至5mL;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續培養,直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。

       

      如需長期使用,您可將傳代了的細胞凍存在-80°C保存。

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