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IVT RNA合成

體外轉錄（IVT）是一種實驗室常用的技術，主要是利用含有T7啟動子，T3或SP6啟動子序列的DNA為模板，分別在含有T7、T3或SP6 RNA聚合酶的條件下，以NTP或者修飾堿基為底物合成與模板DNA中一條鏈互補的RNA，可以在無細胞環境中大量生成RNA分子。IVT RNA在RNA疫苗，基因編輯，多能干細胞的生成以及基于RNA擴增的診斷技術的開發方面發揮了重要作用。

Azenta安升達基于豐富的核酸合成經驗以及先進的RNA質控設備，擁有完善的RNA生產平臺，為醫藥企業、基因治療公司和科研機構提供RNA合成服務。生產規模從μg到mg級別，產品交付周期短、質控嚴格，能滿足醫藥公司臨床前研究和科研機構基礎研究等需求，幫助加速科研進程。

服務優勢

一站式服務——從基因合成到IVT RNA合成

多種規格——提供從μg到mg級別的IVT RNA合成服務

多種產品類型——mRNA、circRNA、sgRNA、dsRNA

多種選擇——提供現貨和定制化服務，滿足客戶不同科研需求

服務流程

RNA合成服務流程

定制化服務

安升達可提供IVT mRNA、circRNA、sgRNA和dsRNA的合成服務，滿足客戶不同研究領域的應用需求。

mRNA的修飾包括：加帽、加尾、核苷酸修飾（Ψ或N1-Me-Pseudo UTP）。

產品類型	長度	規格	修飾
mRNA	81-6000 nt	100 μg-10mg	加帽、加尾、核苷酸修飾（Ψ，N1-Me-Pseudo UTP或5mC）
	81-6000 nt	＞10mg（咨詢）
	＞6000 nt	咨詢
circRNA	81-3000 nt	20 μg-1mg	無修飾
	＞3000nt	咨詢	無修飾
sgRNA	＜150nt	訂購量可定制	-
dsRNA	＜8000 nt		-
siRNA*	20~25nt		提供多種核苷酸修飾定制

*：siRNA為化學合成

現貨產品

名稱	修飾類型	規格
copGFP	帽子結構：Cap1 UTR：5’UTR+3’UTR 修飾堿基：無修飾/N1-Me-Pseudo UTP Poly（A）長度：110 nt	100 μg/tube 濃度：1 μg/uL 緩沖液：Rnase-free water 可選干粉發貨
Luciferase	帽子結構：Cap1 UTR：5’UTR+3’UTR 修飾堿基：無修飾/N1-Me-Pseudo UTP Poly（A）長度：110 nt	100 μg/tube 濃度：1 μg/uL 緩沖液：Rnase-free water 可選干粉發貨
mCherry	帽子結構：Cap1 UTR：5’UTR+3’UTR 修飾堿基：無修飾/N1-Me-Pseudo UTP Poly（A）長度：110 nt	100 μg/tube 濃度：1 μg/uL 緩沖液：Rnase-free water 可選干粉發貨
Cas9	帽子結構：Cap1 修飾堿基：無修飾/N1-Me-Pseudo UTP Poly（A）長度：110 nt	100 μg/tube 濃度：1 μg/uL 緩沖液：RNase-free water 可選干粉發貨
copGFP-circRNA /Luciferase-circRNA /mCherry-circRNA /Cas9-circRNA	/	10 μg/tube 濃度：1 μg/uL 緩沖液：RNase-free water 可選干粉發貨

QC檢測

	檢測項目		檢測方法
標準	Linear RNA	DNA模板測序	Sanger測序
		濃度	nanodrop定量
		純度/完整度	A260/280
		純度/完整度	瓊脂糖凝膠電泳
	circRNA	純度	RNaseR消化
	circRNA	接口測序	Sanger測序
定制化*	Linear RNA	RNA長度及完整性	毛細管電泳（2100，2200等）
		加帽效率檢測	LC-MS
		polyA長度檢測	酶切和CE
		RNA-SEQ	NGS測序
		蛋白質殘留	Nano Orange 分析
		DNA殘留	qPCR
		dsRNA含量	ELISA
		內毒素（定量）	定量
		內毒素（半定量）	半定量
		生物負載	生物負載實驗
	circRNA	純度	毛細管電泳檢測
	circRNA	circRNA全長鑒定	反轉錄后PCR擴增，Sanger測序

注：* 定制化的QC均需要支付額外的費用。

案例1 不同長度mRNA合成

RNA-不同長度mRNA合成

1:113 nt RNA; 2:164 nt RNA; 3:303 nt RNA; 4:1336 nt RNA; 5:1926 nt RNA; 6: 3204 nt RNA; 7: 4001 nt RNA; 8: 7192 nt RNA; 9:5292 nt RNA;

案例2 IVT合成cap1和Ψ修飾的mRNA

加帽加尾以及Ψ修飾，可提高IVT mRNA的穩定性并且增強其翻譯能力，降低mRNA的免疫原性。

N1-Me-Pseudo UTP修飾的mRNA，轉染到HEK293T細胞中，可以高效的表達coGFP.熒光蛋白

IVT合成cap1和Ψ修飾的mRNA

案例3 circRNA合成

結果顯示，安升達升級優化生產工藝后合成的環狀RNA，接口處序列正確，純度高，

無Linear RNA等其他雜質，穩定性高，細胞轉染7天后仍穩定表達。

圖片1IVTRNA合成更新

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