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      IVT RNA合成


      體外轉錄(IVT)是一種實驗室常用的技術,主要是利用含有T7啟動子,T3或SP6啟動子序列的DNA為模板,分別在含有T7、T3或SP6 RNA聚合酶的條件下,以NTP或者修飾堿基為底物合成與模板DNA中一條鏈互補的RNA,可以在無細胞環境中大量生成RNA分子。IVT RNA在RNA疫苗,基因編輯,多能干細胞的生成以及基于RNA擴增的診斷技術的開發方面發揮了重要作用。

      Azenta安升達基于豐富的核酸合成經驗以及先進的RNA質控設備,擁有完善的RNA生產平臺,為醫藥企業、基因治療公司和科研機構 提供RNA合成服務。生產規模從μg到mg級別,產品交付周期短、質控嚴格,能滿足醫藥公司臨床前研究和科研機構基礎研究等需求, 幫助加速科研進程。

      服務優勢

      一站式服務——從基因合成到IVT RNA合成

      多種規格——提供從μgmg級別的IVT RNA合成服務

      多種產品類型——mRNA、circRNA、sgRNA、dsRNA

      多種選擇——提供現貨和定制化服務,滿足客戶不同科研需求

      服務流程

      RNA合成服務流程

      定制化服務

      安升達可提供IVT mRNA、circRNA、sgRNAdsRNA的合成服務,滿足客戶不同研究領域的應用需求。

      mRNA的修飾包括:加帽、加尾、核苷酸修飾(ΨN1-Me-Pseudo UTP)。

       產品類型  長度

      規格 

      修飾 

       mRNA  81-6000 nt  100 μg-10mg

      加帽、加尾、核苷酸修飾(Ψ,N1-Me-Pseudo UTP5mC

       >10mg(咨詢)
       >6000 nt  咨詢
       circRNA  81-3000 nt  20 μg-1mg  無修飾
        3000nt  咨詢
       sgRNA  <150nt  訂購量可定制  -
       dsRNA  <8000 nt  -
       siRNA*  20~25nt  提供多種核苷酸修飾定制

       

      *:siRNA為化學合成

       

      現貨產品

       

       名稱  修飾類型  規格
       copGFP

      帽子結構:Cap1

      UTR5UTR+3UTR
      修飾堿基:無修飾/N1-Me-Pseudo UTP
      Poly
      A)長度:110 nt

       100 μg/tube

      濃度:1 μg/uL
      緩沖液:Rnase-free water

      可選干粉發貨

       Luciferase  帽子結構:Cap1

      UTR5UTR+3UTR
      修飾堿基:無修飾/N1-Me-Pseudo UTP
      Poly
      A)長度:110 nt

       100 μg/tube

      濃度:1 μg/uL
      緩沖液:Rnase-free water

      可選干粉發貨

       mCherry  帽子結構:Cap1

      UTR5UTR+3UTR
      修飾堿基:無修飾/N1-Me-Pseudo UTP
      Poly
      A)長度:110 nt

       100 μg/tube

      濃度:1 μg/uL
      緩沖液:Rnase-free water

      可選干粉發貨

       Cas9  帽子結構:Cap1

      修飾堿基:無修飾/N1-Me-Pseudo UTP
      Poly
      A)長度:110 nt

       100 μg/tube

      濃度:1 μg/uL
      緩沖液:RNase-free water

      可選干粉發貨

      copGFP-circRNA

      /Luciferase-circRNA

      /mCherry-circRNA

      /Cas9-circRNA 

       /  10 μg/tube

      濃度:1 μg/uL
      緩沖液:RNase-free water

      可選干粉發貨

             

      QC檢測

       

        檢測項目  檢測方法 
       標準  Linear RNA  DNA模板測序

      Sanger測序 

       濃度  nanodrop定量
       純度/完整度  A260/280

      瓊脂糖凝膠電泳 

       circRNA  純度

      RNaseR消化 

       接口測序

      Sanger測序

       定制化*  Linear RNA  RNA長度及完整性  毛細管電泳(2100,2200等)

      加帽效率檢測

       LC-MS
       polyA長度檢測  酶切和CE

      RNA-SEQ

       NGS測序
       蛋白質殘留  Nano Orange 分析

      DNA殘留

      qPCR 

       dsRNA含量  ELISA
       內毒素(定量)  定量
       內毒素(半定量)

      半定量 

       生物負載  生物負載實驗
       circRNA  純度  毛細管電泳檢測
       circRNA全長鑒定  反轉錄后PCR擴增,Sanger測序
               

      注:* 定制化的QC均需要支付額外的費用。

      案例1  不同長度mRNA合成

      RNA-不同長度mRNA合成

      1:113 nt RNA; 2:164 nt RNA; 3:303 nt RNA; 4:1336 nt RNA; 5:1926 nt RNA; 6: 3204 nt RNA; 7: 4001 nt RNA; 8: 7192 nt RNA; 9:5292 nt RNA; 

       

       

      案例2  IVT合成cap1和Ψ修飾的mRNA

      加帽加尾以及Ψ修飾,可提高IVT mRNA的穩定性并且增強其翻譯能力,降低mRNA的免疫原性。

      N1-Me-Pseudo UTP修飾的mRNA,轉染到HEK293T細胞中,可以高效的表達coGFP.熒光蛋白

      IVT合成cap1和Ψ修飾的mRNA

       

      案例3  circRNA合成

       

      結果顯示,安升達升級優化生產工藝后合成的環狀RNA,接口處序列正確,純度高,

      Linear RNA等其他雜質,穩定性高,細胞轉染7天后仍穩定表達。

      圖片1IVTRNA合成更新

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