基因敲除：移碼突變

CRISPR/Cas是一種原核生物的自適應免疫系統，抵御來自噬菌體或外源質粒的入侵。這個原核生物系統的已廣泛被分子生物學所采用，目前已成為基因組工程最強大和最通用的平臺之一。 CRISPR/Cas9是一種簡單而快速的工具，不僅可對各種物種（動物、植物、微生物等）中的內源基因進行有效修飾（敲除、敲入、定點突變），對其進行優化還可實現強大的轉錄抑制或靶基因的激活。CRISPR/Cas9的簡便性使其在許多領域廣泛應用，包括基礎研究，生物技術和生物醫學^[1,2,3]。
CRISPR/Cas9編輯系統是在sgRNA（約20nt，與靶基因序列互補）的引導下，Cas9特異性切割目標基因，造成DNA雙鏈的斷裂（double-strand DNA breaks，DSBs），從而引起生物體內的DNA損傷修復。這種修復作用主要包括兩種途徑，一種是利用非同源重組（NHEJ）的修復，即易錯修復，可能造成基因組的隨機插入或缺失突變，這種方式常導致靶基因失去功能，基因敲除就是利用該修復機制^[1,2]。另一種是利用同源重組修復（HDR），即精準修復，借助外源引入一段與預期編輯位點上下游緊鄰且高度同源的DNA修復模板（donor，可以是短單鏈DNA序列（ssDNA）或質粒）介導序列的替換或插入，基因敲入和定點突變就是利用該修復機制^[3]。