兼并引物PCR (degenerate primer PCR) 是指用設計引物的方法來擴增所有已知順序核苷酸序列的PCR 法。因為密碼子具有兼并性,為了擴增一些已知編碼順序的核酸序列,可通過設計兼并引物進行擴增。
兼并堿基,也稱為簡并堿基,是根據密碼子的兼并性,用一個字母符號代替某兩個或者更多常規堿基。兼并引物就是含有兼并堿基的引物序列的混合物。
傳統合成方法,由于反應順序、反應活性不同,難以控制,最終得到的比例就會和設計的相差甚遠。
AZENTA開發出調和比例提前預混合的方案專門用于解決兼并引物合成。
Trimer引物是3個核苷按預定種類和順序連接起來所形成的三聯核苷(Trimer phosphoramidites),這些不同的三聯核苷與不同的氨基酸的一一對應。將多種Trimer引物作為整體的合成原料,合成至序列中預定位置,即可得到符合預定序列的引物庫。
獨立生產工藝流程
精準兼并堿基混合
嚴格質量控制標準
專享優質定制服務
本案例中,安升達準確構建了由11個定制氨基酸組成的突變文庫,包含部分使用頻率在5%以內的氨基酸。
結果展示的序列中,每一位點上實際構建得到的氨基酸對比符合預期。利用高通量測序檢測,文庫多樣性、均一性良好。
兼并引物混合方式對比